快速、可定制、定量研究的MassARRAY甲基化

来源: 发表日期:2018-07-27 浏览量:157

  上次我们介绍了利用MassARRAY系统检测SNP基因分型的技术,其实MassARRAY系统还可以检测特定区域的甲基化程度,接下来就带大家了解一下它在甲基化定量检测方面的应用!


  甲基化是什么?

  作为表观遗传学的重要机制,DNA甲基化不仅对基因的表达具有调控作用,而且这种调控作用可以随着细胞分裂在世代间稳定遗传。因此,DNA甲基化是一种高于基因组序列水平的基因表达调控机制,是将基因型和表型联系起来的一条纽带,已成为当前分子生物学的研究热点之一。

  DNA甲基化是指在甲基转移酶的催化下,DNA的CG二核苷酸中的胞嘧啶被选择性的添加甲基,形成5-甲基胞嘧啶,常见于基因的5′—CG—3′序列。


  MassARRAY甲基化定制验证服务基于MassARRAY分子量阵列技术,是Agena公司推出的世界上领先的基因分析工具,通过切割反应与灵敏、可靠的MALDI-TOF质谱技术相结合,实现单基因10%-90%的DNA甲基化定量检测,误差小于5%。 

  康普森生物为您提供2kb定制区段内单个位点的MassARRAY甲基化验证服务,助力您的科学研究!

  那么MassARRAY系统是如何检测特定区域的甲基化呢?就让小编来揭开这层神秘的面纱吧!

  MassARRAY甲基化定制验证服务

  技术原理及流程


  亚硫酸氢盐处理:将样本DNA中没有甲基化的C全部转化为U(相当于DNA中的T);

  待测片段扩增:使用特殊设计的一对引物扩增样本,得到带有T7 RNA聚合酶启动子序列的扩增产物;

  体外转录:利用T7 RNA聚合酶,将扩增产物转录为RNA片段;

  酶切:利用RNase A将RNA片段切割成携带有CpG位点的小片段;

  检测:使用MassARRAY系统检测产物。由于同一片段中,只有CpG和CpA之间16Da的分子量差别,即质谱图中两者峰的差距。

  结果展示


  引物设计方案


  检测结果图

  项目流程


  应用案例

  2016年6月20日,发表在PNAS(IF:9.504)上的一篇文章“Epigenetic modification of OXT and human sociability”利用MassARRAY甲基化技术对129个样本进行检测,发现OXT基因的甲基化程度与社会行为和大脑功能密切相关,因为OXT基因负责生产一种叫做催产素的激素,这种激素与人类和其他哺乳动物的社会行为有着广泛的联系。这也为今后改善自闭症和治疗一些社会行为障碍提供很好的研究思路。


  OXT基因结构


  在社会认知过程中OXT基因的甲基化与大脑活动的关系

  参考文献

  Haas BW, Filkowski MM, Cochran RN,et al. Epigenetic modification of OXT and human sociability. Proc Natl Acad Sci U S A.2016


分享: